CN102066303A - 取代1，3-环戊二酮减弱的内皮炎症以及内皮-单核细胞相互作用 - Google Patents

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Abstract

本发明描述利用取代1，3-环戊二酮化合物来降低心血管危险的组合物和方法。

Description

取代1，3-环戊二酮减弱的内皮炎症以及内皮-单核细胞相互作用
相关申请的交叉引用
本专利申请要求于2008年4月2日提交的美国临时申请61/041,631的优先权，其内容整体援引加入本文。
发明背景
发明领域
本发明一般涉及可用于通过蛋白激酶调节来调节与内皮功能及心血管并发症有关的炎症通路(inflammatory pathway)的方法和组合物，所述炎症通路包括(1)在内皮细胞(HAEC)中的TNFa介导的VCAM-1、E选择蛋白及MCP-1以及(2)TNFa介导的单核细胞-内皮相互作用。更具体地，本发明涉及利用取代1，3-环戊二酮化合物的方法和组合物。
相关技术说明
单核细胞的激活以及对内皮的粘附在炎性疾病和心血管疾病中起关键作用。该过程因导致糖尿病并发症的高血糖症而进一步复杂化。TNFa及高血糖症二者激活许多炎症反应中涉及的基因(Shanmugam N，Gae Gonzalo IT，Natarajan R.Molecular mechanisms of high glucose-induced cyclooxygenase-2 expression in monocytes.Diabetes.53(3)：795-802，2004)。
MCP-1对于单核细胞是有效的化学引诱物，并且通过促进单核细胞浸润及粘附至内皮而在早期动脉粥样化形成中起关键作用，导致形成粥样硬化斑块(Charo IF，Taubman MB.Chemokines in the pathogenesis of vascular disease.Circ Res.29；95(9)：858-66，2004)。
基质金属蛋白酶(MMPs)是细胞外隙中的主要蛋白水解酶，它们通过分解细胞外基质(ECM)的能力而有助于使斑块纤维帽(plaque cap)变薄(Nagase H，Visse R，Murphy G.Structure and function of matrix metalloproteinases and TIMPs.Cardiovasc Res 2006；69：562-73)。粥样硬化斑块破裂，在原因上与大部分急性冠状动脉综合征相关，通常发生在持续性炎症及胶原降解的部位(Virmani R，Kolodgie FD，Burke AP，Farb A，Schwartz SM.Lessons from sudden coronary death：a comprehensive morphological classification scheme for atherosclerotic lesions.Arterioscler Thromb Vase Biol 2000；20：1262-75)。
临床研究及实验性研究已表明MMP-9(明胶酶B)为粥样硬化斑块稳定性的关键决定因素(Gough PJ，Gomez IG，Wille PT，Raines EW.Macrophage expression of active MMP-9 induces acute plaque disruption in apoE-deficient mice.J Clin Invest 2006；116：59-69.；Fukuda D，Shimada K，Tanaka A，Kusuyama T，Yamashita H，Ehara S等.Comparison of levels of serum matrix metalloproteinase-9 in patients with acute myocardial infarction versus unstable angina pectoris versus stable angina pectoris.Am J Cardiol 2006；97：175-80；Blankenberg S，Rupprecht HJ，Poirier O，Bickel C，Smieja M，Hafner G等.Plasma concentrations and genetic variation of matrix metalloproteinase 9 and prognosis of patients with cardiovascular disease.Circulation 2003；107：1579-85)。MMP-9主要源于单核细胞/巨噬细胞(Chase AJ，Bond M，Crook MF，Newby AC.Role of nuclear factor kappa B activation in metalloproteinase-1，-3，and-9 secretion by human macrophages in vitro and rabbit foam cells produced in vivo.Arterioscler Thromb Vase Biol 2002；22：765-71.；Stawowy P，Meyborg H，Stibenz D，Borges Pereira Stawowy N，Roser M，Thanabalasingam U等.Furin-like proprotein convertases are central regulators of the membrane type matrix metalloproteinase-promatrix metalloproteinase-2 proteolytic cascade in atherosclerosis.Circulation 2005；111：2820-7.)，即动脉粥样硬化开始、发展及并发症中涉及的主要细胞类型。在MNCs中，MMP-9可被许多炎症介质(包括TNF-α)强烈诱导(Stawowy P，Meyborg H，Stibenz D，Borges Pereira Stawowy N，Roser M，Thanabalasingam U等.Furin-like proprotein convertases are central regulators of the membrane type matrix metalloproteinase-promatrix metalloproteinase-2 proteolytic cascade in atherosclerosis.Circulation 2005；111：2820-7)。
先前已经揭示诸如阿司匹林、糖皮质激素及姜黄素的抗炎化合物通过抑制NF-κB信号通路来发挥它们的作用(Kopp E和Ghosh S.Inhibition of NF-kappa B by sodium salicylate and aspirin.Science.22：270(5244)：2017-9，1994；De Bosscher K，Schmitz ML，Vanden Berghe W，Plaisance S，Fiers W，Haegeman G.Glucocorticoid-mediated repression of nuclear factor-kappaB -dependent transcription involves direct interference with transactivation.Proc Natl Acad Sci USA.9；94(25)：13504-9，1997；Pan MH，Lin-Shiau SY，Ho CT，Lin JH，Lin JK.Suppression of lipopolysaccharide-induced nuclear factor-kappaB activity by theaflavin-3，3′-digallate from black tea and other polyphenols through down-regulation of IkappaB kinase activity in macrophages.Biochem Pharmacol.15；59(4)：357-67，2000)。
炎症介质(例如TNFa激活NFkB)调节许多在炎症应答中涉及的基因(例如促炎细胞因子、粘着分子、包括单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在内的趋化因子)的表达(Ueda A，Ishigatsubo Y，Okubo T，Yoshimura T.Transcriptional regulation of the human monocyte chemoattractant protein-1 gene.Cooperation of two NF-kappaB sites and NF-kappaB/Rel subunit specificity.J Biol Chem.5；272(49)：31092-9，1997)。已证明高血糖症通过单核细胞中PKC及NF-kB信号通路的激活来激活炎症(Devaraj S，Venugopal SK，Singh U，Jialal I.Hyperglycemia induces monocytic release of interleukin-6 via induction of protein kinase c-{alpha}and-{beta}.Diabetes.54(1)：85-91，2005；Shanmugam N，Gae Gonzalo IT，Natarajan R.Molecular mechanisms of high glucose-induced cyclooxygenase-2 expression in monocytes.Diabetes.53(3)：795-802，2004)。
蛋白质的可逆磷酸化调节细胞生理的几乎所有方面。特定激酶及磷酸酶的长期失调通过改变细胞内蛋白质的正常磷酸化状态来发挥的作用，引起包括癌症及炎性疾病在内的许多病症。因此，蛋白激酶是主要的治疗靶点。
特定激酶的过度激活尤其与许多疾病有关，而且正如预料，已证明某些靶向激酶抑制剂在正常化细胞生理且带来症状缓解中是有效的。例如，伊马替尼(酪氨酸激酶抑制剂)在白血病的治疗中是有效的[Savage DG，N Eng J Med 2002]；厄洛替尼(表皮生长因子受体抑制剂)对于肺癌是有效的(Reviewed in Expert Opin Pharmacother，Gridelli，2007)；以及鲁伯斯塔(ruboxistaurin)(PKC-β II抑制剂)对于减少糖尿病患者的微血管并发症是有效的(Joy SV等，Ruboxistaurin，a protein kinase C beta inhibitor，as an emerging treatment for diabetes microvascular complications.Ann Pharmacother.39(10)：1693-9，2005)。
内皮源一氧化氮(NO)是调节血管内皮细胞应答性并由此调节全身血压、血管重构及血管生成的心血管体内稳态(cardiovascular homeostasis)的关键性决定因素(Moncada S，Higgs A：The L-Arginine-Nitric Oxide pathway.NEJM 1993；329：2002-12)。对连续生成NO的重要刺激是与穿过内皮的血流相关的粘滞曳力。内皮NO合成酶(eNOS)处于蛋白激酶Akt的直接调控之下。切应力及高血糖症通过一系列介导激酶直接激活Akt(Dimmeler S，Fleming I，Fisslthaler B，Hermann C，Busse R，Zeiher AM.Activation of nitric oxide synthase in endothelial cells by Akt-dependent phosphorylation.Nature 1999；399：601-5)。实际抑制Akt的这些激酶之一是PKCβ。PKCβ被高血糖症激活。已证明高血糖症直接抑制内皮依赖性血管舒张(Rammos G，Peppes V，Zakopoulos N.Transient Insulin Resistance in Normal Subjects：Acute Hyperglycemia inhibits Endothelial-Dependent Vasodilation in Normal Subjects.Metabolic Syndrome and Related Disorders 2008；6(3)：159-170)。如通过血流介导性血管舒张(FMD)所测量的，鲁伯斯塔(Roboxistaurin)抑制PKCβ并由此正常化内皮功能(Mehta NN，Sheetz M，Price K，Comiskey L，Amrutia S，Iqbal N，Mohler ER，Reilly MP.Selective PKC beta inhibition with roboxistaurin and endothelial function in type-2 diabetes mellitus.Cardiovasc Drugs Ther 2009；23(1)：17-24)。FMD是一种用于在诱导低血氧后测量肱动脉血流生理的非侵入性超声检查技术(Corretti MC等，Guidelines for the Ultrasound Assessment of Endothelial-Dependent Flow-Mediated Vasodilation of the Brachial Artery-A Report of the International Brachial Artery Reactive Task Force.J Am Coll Cardiol 2002；39(2)：257-65)。
先前，我们报导过数种源自啤酒花穗的化合物在RAW 264.7细胞中有效抑制脂多糖(LPS)激发的PGE2的形成，所述化合物包括葎草酮、蛇麻酮、异葎草酮及还原异葎草酮(reduced isohumulone)(用作矫味剂的改性啤酒花提取物)(Tripp M，Darland G，Lerman R，Lukaczer D，Bland J，Babish J：Hop and modified hop extracts have potent in vitro anti-inflammatory properties.Acta Hort(ISHS)2005，668：217-228)。其中最具活性的是源自啤酒花的取代1，3-环戊二酮化合物，其为四氢-异α酸，在本文中统称为Meta-060或“THIAA”。Meta-060是由三种相关类似物，即比例为49∶42∶9的四氢-异-葎草酮、-辅葎草酮和-加葎草酮的混合物组成的改性啤酒花提取物。META-060通过在RAW 264.7细胞中抑制NFkB信号通路来抑制LPS诱导的PGE2的产生及COX-2的表达(Desai A，Konda VR，Darland G，Austin M，Prabhu KS，Bland JS等，META060inhibits multiple kinases in the NF-kB pathway and suppresses LPS-mediated inflammation in vitro and ex vivo.Inflamm Res 2009)。
巨噬细胞/单核细胞激活关键性地参与许多慢性炎性疾病的病理生理学。炎症在动脉粥样硬化过程的所有阶段的作用已成为热门的研究领域，并且存在对治疗动脉粥样硬化的新颖且创新疗法的需求。就此而言，发明人已确定Meta-060对NFkB通路的抑制作用，其通过针对NFkB激活中涉及的关键激酶进行激酶抑制而起作用。进一步地，为了评价特异性，评价了META-060针对85种不同激酶的效力。
另外，发明人报告了META-060抑制NFkB调节下的且与心血管并发症有关的其它炎性标记物的能力，所述其它炎性标记物包括(1)在内皮细胞(HAEC)中的TNFa介导的VCAM-1、E选择蛋白和MCP-1以及(2)TNFa介导的单核细胞-内皮相互作用。
发明概述
本发明一般涉及可用于通过蛋白激酶调节来调节与内皮功能及心血管并发症有关的炎症通路的方法和组合物，所述炎症通路包括(1)在内皮细胞(HAEC)中的TNFa介导的VCAM-1、E选择蛋白及MCP-1以及(2)TNFa介导的单核细胞-内皮相互作用。更具体地，本发明涉及利用取代1，3-环戊二酮化合物的方法和组合物。
本发明的第一实施方案描述在有需要的个体中改善心血管危险因素的方法。所述方法包括用治疗有效量的取代1，3-环戊二酮化合物治疗所述个体，其中所述量调节与心血管危险因素相关的标记基因表达的表达。
本发明的第二实施方案描述在有需要的个体中改善血管弹性的方法，其中所述方法包括用治疗有效量的取代1，3-环戊二酮化合物治疗所述个体，其中所述量增加血管弹性或血管舒张(dilation)。
本发明的第三实施方案描述在个体中改善心血管健康的组合物。在该实施方案中，所述组合物包含治疗有效量的取代1，3-环戊二酮化合物，其中所述量(a)调节与心血管危险相关的标记基因表达的表达；或(b)增加血管弹性或血管舒张。
附图简述
图1图示了取代1，3-环戊二酮化合物对调节炎症的激酶的激酶活性y的影响，并且通过基尼系数(Gini coefficient)表达提供取代1，3-环戊二酮化合物的特异性的表现。
图2图示了取代1，3-环戊二酮化合物对所选择的内皮炎性生物标记的抑制的影响。
图3图示了取代1，3-环戊二酮化合物对内皮-单核细胞相互作用的抑制作用。
图4描述了META-060对THP-1细胞与HAEC细胞相互作用的抑制。
图5描述了META-060对MCP-1在THP-1细胞中的表达的抑制。
图6显示了META-060在THP-1细胞中对TNFa及LPS介导的MMP-9水平的抑制作用。图A和图B描述了TNFa及LPS各自对MMP-9水平的影响，而图C提供了显示对MMP-9表达的影响的酶谱。
图7图示了META-060在THP-1细胞中对LPS介导的NFkB结合的抑制作用。
图8显示了META-060在THP-1细胞中对TNFa活化基因的抑制作用。
发明详述
本发明一般涉及可用于通过蛋白激酶调节来调节与内皮功能及心血管并发症有关的炎症通路的方法和组合物，所述炎症通路包括(1)在内皮细胞(HAEC)中的TNFa介导的VCAM-1、E选择蛋白及MCP-1以及(2)TNFa介导的单核细胞-内皮相互作用。更具体地，本发明涉及利用取代1，3-环戊二酮化合物的方法及组合物。
本文所提及的专利、公布的申请以及科学文献构成本领域技术人员的知识，并整体援引加入本文，达到与具体并分别指明将每一篇援引加入相同的程度。本文所引用的任何参考文献与本说明书的具体教导之间的任何冲突均应通过以后者为准来解决。同样地，本领域所理解的词或短语的定义与本说明书中所具体教导的词或短语的定义之间的任何矛盾均应通过以后者为准来解决。
除非另外定义，本文所使用的技术术语及科学术语具有本发明所属领域的技术人员通常理解的意思。本文提及本领域技术人员已知的多种方法和材料。阐述重组DNA技术的一般原理的标准参考著作包括：Sambrook等，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，2nd Ed.，Cold Spring Harbor Laboratory Press，New York(1989)；Kaufman等，Eds.，Handbook of Molecular and Cellular Methods in Biology in Medicine，CRC Press，Boca Raton(1995)；McPherson，Ed.，Directed Mutagenesis：A Practical Approach，IRL Press，Oxford(1991)。阐述药理学一般原理的标准参考著作包括Goodman和Gilman的The Pharmacological Basis of Therapeutics，11th Ed.，McGraw Hill Companies Inc.，New York(2006)。
在本说明书及所附权利要求书中，除非上下文另有明确规定，单数形式包括复数的所指对象。除非上下文另有明确规定，当用于本说明书时，单数形式“a”、“an”及“the”还具体地包括它们所涉及的术语的复数形式。另外，除非另有具体规定，本文所用的词“或”是以“和/或”的“内含的”意义使用，而非以“或者(either)/或(or)”的“排外的”意义使用。本文所用的术语“约”意指近似，在附近，大致或大约。当术语“约”与数值范围结合使用时，其通过扩展所给数值的上下边界来调整所述范围。一般而言，术语“约”在本文中用于调整以20％的方差高于和低于所给数值的数值。
如本文所用，变量的数值范围旨在表达可以用等于该范围内的任意值的变量来实施本发明。因此，对于固有离散的变量，所述变量可以等于所述数值范围的任意整数值，包括所述范围的端点。类似地，对于固有连续的变量，所述变量可以等于所述数值范围的任何实数值，包括所述范围的端点。例如，描述为具有0至2的值的变量，其对于固有离散的变量可以是0、1或2，并且其对于固有连续的变量则可以是0.0、0.1、0.01、0.001或任意其它实数值。
在下文中详细提及本发明的具体实施方案。虽然会结合这些具体实施方案对本发明加以描述，但应当理解这并非意味着将本发明限于这样的具体实施方案。相反地，其意图涵盖可包括在如所附权利要求所定义的本发明的精神和范围内的替代、修改和等效物。在以下描述中，阐述了许多具体细节以提供对本发明的透彻理解。可以在没有这些具体细节中的一些或全部的情况下实施本发明。在其它情况下，为了避免不必要地使本发明含糊不清，没有对公知方法的操作进行详细描述。
本领域技术人员已知的任何合适的材料和/或方法均可用于实施本发明。尽管如此，仍对优选的材料及方法进行描述。除非另有说明，在以下描述和实施例中所涉及的材料、试剂等均可由商业来源获得。
本发明的第一实施方案描述在有需要的个体中改善心血管危险因素的方法。所述方法包括用治疗有效量的取代1，3-环戊二酮化合物治疗所述个体，其中所述量调节与心血管危险因素相关的标记基因表达的表达。
在该实施方案的一些方面，所述取代1，3-环戊二酮化合物选自(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮以及(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-戊酰基环戊-2-烯-1-酮。
在其它方面，所调节的与心血管危险相关的标记基因选自TNFα、MCP-1、VCAM-1、MMP-3、ICAM1以及SDF1。
在其它方面，所述方法进一步包括生活方式改变或药物治疗，其中所述生活方式改变或药物治疗选自降低血压，调节胆固醇水平，治疗糖尿病，增加锻炼，减少炎症、肥胖和体重，治疗促血栓形成因子(prothrombotic factor)，减少血清同型半胱氨酸和脂蛋白(a)，减少血清甘油三酯，戒烟以及降低压力。
如本文所用，“改善心血管危险因素”是指稳定、减少或消除确定的心血管危险因素，由此促进改善的心血管健康。心血管危险因素的代表性非限定性实例包括吸烟、血压升高、血清总(及LDL)胆固醇升高、糖尿病、年龄增长、肥胖、身体缺乏活动、早发性心脏病(premature cardiac heart disease)家族史、血清甘油三酯升高、小LDL颗粒、血清同型半胱氨酸或脂蛋白(a)升高、促血栓形成因子(例如纤维蛋白原)以及炎症因子(例如C-反应蛋白质)。
短语“调节与心血管危险因素相关的标记基因表达的表达”是指向上或向下调节所述基因的表达，或者其相关基因产物的生成或活性。确定的或与各方面的心血管危险因素相关的基因的非限定性代表性实例包括：AQP1、B3GAT3、BCL3、BTG2、C1ORF106、C1ORF38、C1ORF38、CACNA1A、CCDC75、CCL2、CCL8、CCND1、CD40、CD44、CD86、CLIP2、DDX58、DKFZP434H1419、DSC3、EHD1、EIF2AK2、FAM105A、FGD2、FKBP5、G3BP1、GPR153、HTR4、ICAM1、ICOSLG、IFI44、IFI44L、IFIH1、IFIT1、IFIT2、IFIT3、IGKC、IGKV1-5、IKBKE、IKZF1、IL10RA、IL18RAP、IL1B、IL7R、IRF7、ISG15、KIAA1731、KRT17、LHX、LIMD2、LTB、MARCKSL1、MCP-1、MMP3、MMP14、MMP9、MX1、MX2、NA、NAB1、NAB2、NOD2、NPTX1、OAS1、OAS2、OAS3、OASL、PDE4B、PIP5K1B、PRKCH、PTGIR、PTPN14、RASA、RASA4、RASSF4、REC8、RIN3、RSAD2、SAFB2、SAMD9、SDF1、SEMA4C、SH3TC 1、SH3TC、SIGLEC1、SLAMF8、SLC16A3、SLC1A3、SP110、SPI1、SPIB、SSPO、STAT1、TAP1、TAPBP、THBD、TNFα、TRAC、TRIM22、UBE2B、UBQLN4、UBQLN4P、UST、VCAM1、XAF1、ZFP2、ZMIZ2以及ZNF710。
在一些方面，所述生活方式改变或药物治疗选自降低血压，调节胆固醇水平，治疗糖尿病，增加锻炼，减少炎症、肥胖和体重，治疗促血栓形成因子，减少血清同型半胱氨酸和脂蛋白(a)，减少血清甘油三酯，戒烟以及降低压力。
如本文所用，短语“生活方式改变”是指个体为了改善心血管危险因素而可以进行的那些活动，其可不经药物治疗或者与药物治疗相结合。生活方式改变的代表性实例包括但不限于：为减轻体重、控制血压或胆固醇而改变饮食；为缓解压力或减轻体重而增加锻炼；或者戒烟。如本文所用，“药物治疗”是指由医疗保健提供者获得或规定的那些药剂，其可以代替生活方式改变或者与生活方式改变结合使用以促进心血管危险因素的改善。
如本说明书中所用，无论是在权利要求的过渡词中还是在主体中，术语“包含”和“包括”均应解释为开放式的含义。也就是说，所述术语应解释为与短语“具有至少”或“包括至少”同义。当在方法的上下文中使用时，术语“包括”是指所述方法至少包括所述步骤，但可以包括其它步骤。当在化合物或组合物的上下文中使用时，术语“包含”是指所述化合物或组合物至少包括所述特征或化合物，但还可以包括其它特征或化合物。
如本文所用，术语“衍生物”或“衍生”的物质是指在结构上与另一物质相关并且在理论上可从其获得的化学物质，即可以由另一物质制备的物质。衍生物可以包括通过化学反应获得的化合物。
所用术语“药学上可接受的”的含义为与所述组合物的其它组分相容并且对其接受者是无害的。
如本文所用，“四氢-异葎草酮”分别指(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮和(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮的顺式及反式形式。
如本文所用，“四氢-异科葎草酮”分别指(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮和(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮的顺式及反式形式。
如本文所用，“四氢-加葎草酮”分别指(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮和(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-戊酰基环戊-2-烯-1-酮的顺式及反式形式。
如本文所用，“四氢-异α酸”(参见表1)或“Meta060”是指四氢-加葎草酮、四氢-异科葎草酮及四氢-异葎草酮中的一种或多种的任意混合物。
表1
四氢异α酸
Figure BPA00001258735900111
Figure BPA00001258735900121
如本文所用，“化合物”可通过它们的化学结构、化学名称或通用名中的任一种来确认。当化学结构与化学名或通用名冲突时，化学结构对于化合物的确认是起决定作用的。本文所述的化合物可以含有一种或多种手性中心和/或双键，因此可以以立体异构体如双键异构体(即几何异构体)、对映异构体或非对映异构体的形式存在。因此，本文所述的化学结构包括所说明或所确认的化合物的所有可能的对映异构体及立体异构体，包括立体异构纯形式(例如几何异构纯、对映异构纯或非对映异构纯)以及对映异构体和立体异构体的混合物。可以使用本领域技术人员所公知的分离技术或手性合成技术将将对映异构体及立体异构体的混合物拆分为它们的组分对映异构体或立体异构体。所述化合物还可以以数个互变异构形式存在，包括烯醇式、酮式及其混合物。因此，本文所述的化学结构包括所说明或所确认的化合物的所有可能的互变异构形式。所述化合物还包括同位素标记的化合物，其中一种或多种原子的原子量不同于通常在自然界中所发现的原子量。可以掺入本发明化合物的同位素的实例包括但不限于2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O等等。化合物可以以非溶剂合物形式和溶剂合物形式(包括水合物形式)存在，以及作为N-氧化物而存在。一般而言，化合物可以为水合物、溶剂合物或N-氧化物。某些化合物可以以多晶型或无定形形式存在。本发明还包括所述化合物的同源物、类似物、水解产物、代谢产物以及前体或前药。一般而言，除非另有说明，所有的物理形式是对于本文的用途而言是等效的，并且意图在本发明的范围之内。
本发明的化合物可以作为盐而存在。具体而言，包括所述化合物的药学上可接受的盐。本发明的“药学上可接受的盐”为本发明化合物以及与所述化合物形成盐(例如镁盐，本文表示为“Mg”或“Mag”)的酸或碱的组合，并且在治疗条件下为个体所耐受。一般而言，本发明化合物的药学上可接受的盐会具有1或更大的治疗指数(最低中毒量与最低治疗有效量的比值)。本领域技术人员会认识到所述最低治疗有效量会随个体以及症状的不同而不同，并会因此而进行调整。
本发明的第二个实施方案描述在有需要的个体中改善血管弹性的方法，所述方法包括用治疗有效量的取代1，3-环戊二酮化合物治疗所述个体，其中所述量增加血管弹性或血管舒张。在该实施方案的一些方面中，所述取代1，3-环戊二酮化合物选自(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮以及(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-戊酰基环戊-2-烯-1-酮。
另一实施方案描述在有需要的个体中改善心血管健康的组合物，其中所述组合物包含治疗有效量的取代1，3-环戊二酮化合物，其中所述量(a)调节与心血管危险相关的标记基因表达的表达；或者(b)增加血管弹性或血管舒张。
在一些方面中，所述取代1，3-环戊二酮化合物选自(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮以及(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-戊酰基环戊-2-烯-1-酮。
在该实施方案的其它方面中，所述组合物进一步包含药学上可接受的赋形剂，其中所述药学上可接受的赋形剂选自包衣剂、等渗及吸收延迟剂、粘合剂、胶粘剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、矫味剂、甜味剂、吸收剂、洗涤剂及乳化剂。另外，在其它方面，所述组合物还包含选自抗氧化剂、维生素、矿物质、蛋白质、脂肪及碳水化合物中的一种或多种成分。
在该实施方案的其它方面中，所述组合物中使用的取代1，3-环戊二酮化合物具有纯度高于50％，优选高于75％，更优选高于90％以及最优选高于95％的所确定的立体异构体(剩余量为其它异构体形式)。在一些方面，所述组合物每剂量包含约50mg至10,000mg，优选100mg至8,000mg，或最优选150mg至6,000mg的所述取代1，3-环戊二酮化合物。
将本发明的化合物与任意公知的药学上可接受的载体(包括稀释剂和赋形剂)任选地配制在药学上可接受的媒介物中[参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，18th Ed.，Gennaro，Mack Publishing Co.，Easton，PA 1990 and Remington：The Science and Practice of Pharmacy，Lippincott，Williams & Wilkins，1995]。而用于生成本发明组合物的药学上可接受的载体/媒介物的类型会取决于向哺乳动物给药所述组合物的方式而不同，通常药学上可接受的载体在生理学上是惰性且无毒的。本发明组合物的制剂可以含有多于一种的本发明的化合物以及用于治疗所治疗的症状/病况的任意其它药理学活性成分。
可以利用本领域技术人员已知的配制方法将本发明的化合物提供于药学上可接受的媒介物中。本发明的组合物可以通过标准途径给药，但优选通过吸入途径给药。本发明的组合物包括适于口服、吸入、直肠、眼部(包括玻璃体内或前房内)、鼻腔、局部(包括含服及舌下)、阴道或胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内、皮内及气管内)给药的那些组合物。此外，可以根据本领域的标准工艺加入聚合物以供给定化合物的持续释放。
适于通过吸入给药的制剂包括可以通过本领域技术人员已知的吸入装置分配的制剂。这样的制剂可以包含诸如粉末和气溶胶的载体。本发明包括适于喷雾以及支气管内使用的液体及粉状组合物，或者经分配计量(dispensing metered dose，“MDI”)的气雾剂单元给药的气雾剂组合物。可以将所述活性成分配制在水性的药学上可接受的吸入剂媒介物(例如等渗盐水或抑菌水及本领域公知的其它类型媒介物)中。为导致或使得必要剂量的所述液体组合物能够被吸入到患者的肺中，通过泵或挤压驱动的雾化喷雾分配器或通过任何其它常规方式将所述液剂给药。含有本发明的抗炎化合物的粉状组合物包括例如与乳糖或其它适于支气管内给药的惰性粉末充分混合的所述活性成分的药学上可接受的粉状制剂。所述粉状组合物可以经分配器(包括但不限于气雾剂分配器)给药或装入易碎的胶囊中，患者可将所述胶囊插入用于戳破胶囊并将粉末在稳定的气流中吹出的装置中。用于所述主题方法的气雾剂制剂通常包含抛射剂、表面活性剂和共溶剂，并且可以被装入由合适的计量阀关闭的常规气雾剂容器中。
所述载体为固体的适于鼻腔给药的本发明组合物的制剂包括粒度在例如20微米至500微米范围内的粗粉，其以嗅剂(snuff)的方式给药，即通过从靠近鼻子处的粉末容器中经鼻腔通道快速吸入而给药。所述载体为液体的例如经鼻腔喷雾、气雾剂或作为滴鼻剂给药的合适制剂包括本发明化合物的水溶液或油溶液。
对于口服给药，可以以如下形式提供本发明的组合物：作为离散单位(discrete unit)，例如各自含有预定量的作为粉末或颗粒的所述活性成分的胶囊剂、囊片剂、软胶囊剂、扁囊剂、丸剂或片剂；作为水性液体或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；或者作为水包油液体乳剂或油包水乳剂以及作为大丸剂等。或者，本发明所有方面的组合物的给药均可经液体溶液剂、混悬剂或酏剂、散剂、锭剂、微粒以及渗透递送体系而实现。
适于肠胃外给药的本发明该方面的组合物的制剂包括水性的和非水性的无菌注射溶液剂，其可以包含抗氧化剂、稳定剂、缓冲剂、抑菌剂以及使所述制剂与预期接受者的血液等渗的溶质；以及水性的和非水性的无菌混悬剂，其可以包含助悬剂及增稠剂。所述制剂可以在单位剂量或多剂量容器(例如密封的安瓿及小瓶)中提供，并且可以在冷冻干燥(低压冻干)条件下存放，仅需在使用之前立即加入无菌液体载体(例如注射用水)。可以从上文所述种类的无菌粉末、颗粒及片剂制备即时注射溶液剂及混悬剂。
可以通过任选地与一种或多种助剂进行压制或模制来制备片剂。可以通过在合适的机器中压制任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活化或分散剂混合的自由流动形式(例如粉末或颗粒)的活性成分来制备压制片剂。可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉状化合物的混合物来制备模制片剂。任选地，可以将所述片剂包衣或刻痕，并且可以将其配制以提供其中活性成分的缓释或控释。
用于直肠给药的本发明组合物的制剂可以制备为具有合适基质(包括例如可可脂)的栓剂。
适于在口腔中局部给药的本发明组合物的制剂包括：在调味基质(通常是蔗糖以及阿拉伯胶或黄蓍胶)中包含所述成分的锭剂；在惰性基质(例如明胶和甘油，或者蔗糖和阿拉伯胶)中包含活性成分的软锭剂；以及在合适的液体载体中包含待给药成分的漱口剂。适于向皮肤局部给药的本发明组合物的制剂可以作为在药学上可接受的载体中包含待给药成分的软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、洗剂以及糊剂而提供。还包括局部递送体系，其为含有待给药成分的透皮贴剂。
适于阴道给药的本发明该方面的组合物的制剂可以作为子宫托、栓剂、棉塞、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或者喷雾剂而提供，其除了本发明的化合物之外还含有本领域已知为合适的药学上可接受的载体。
本文使用的术语“调节”意指通过其所指的化合物、成分等上调或下调所述基因的表达或活性。
如本文所用，术语“蛋白激酶”表示能够将磷酸基从给体分子转移到蛋白质的氨基酸残基的转移酶类酶。对于蛋白激酶以及族/组命名的详细讨论，参见Kostich，M.等，Human Members of the Eukaryotic Protein Kinase Family，Genome Biology 3(9)：research0043.1-0043.12，2002，将其整体援引加入本文。
本发明的方法和组合物意图用于可以感受本发明方法的益处的任何哺乳动物。在这样的哺乳动物之中最重要的是人类，但本发明并非意图受限于此，同样适用于兽用。因此，根据本发明，“哺乳动物”或“有需要的哺乳动物”包括人类以及非人类哺乳动物，尤其是驯养的动物，包括但不限于猫、狗和马。
如本文所用，“治疗”是指与未根据本发明治疗的个体的症状相比，减轻、预防和/或逆转已向其给药本发明化合物的个体的症状。从业者会理解，应在由有经验的从业者(医生或兽医)进行连续临床评价的同时使用本文所述的化合物、组合物以及方法，以确定后续治疗。因此，治疗之后，从业者会根据标准方法评价在减少心血管危险因素或相关失调(dyregularities)方面的任何改善。这样的评价会对是否增加、减少或维持一特定的治疗剂量、给药模式等有所帮助并提供资料。
应当理解，给药本发明化合物的个体不必患有特定的创伤性状态。事实上，可以在任何症状产生之前预防性给药本发明的化合物。术语“治疗的”、“治疗地”以及这些术语的变形用于包括治疗性、缓解性以及预防性使用。因此，如本文所用，通过“治疗或缓解所述症状”是指与未接受这样的给药的个体的症状相比，减轻、预防和/或逆转已向其给药本发明化合物的个体的症状。
术语“治疗有效量”用于表示以有效实现所寻求的治疗结果的剂量治疗。而且，本领域技术人员会理解，可以通过微调和/或通过给药多于一种的本发明的化合物，或者通过将本发明的化合物与另一化合物给药来减少或增加本发明化合物的治疗有效量。参见例如，Meiner，C.L.，″Clinical Trials：Design，Conduct，and Analysis，″Monographs in Epidemiology and Biostatistics，Vol.8 Oxford University Press，USA(1986)。因此，本发明提供针对给定哺乳动物的具体急性症状(exigency)定制给药/治疗的方法。如在下文实施例中所述，可以容易地确定治疗有效量，例如通过以相对低的量起始并通过在评价有益效果的同时逐步增量来凭经验确定有效量。
本领域技术人员会理解，根据患者在任意给定时间的特定医疗状态(包括其它临床因素，例如所述哺乳动物的年龄、体重和状况以及所选择的给药途径)，本发明化合物的给药量会随患者的不同而不同。
如本文所用，“症状”表示患者所经历的以及与具体疾病有关的任何感觉或身体机能的变化，即伴随“X”且被认为是“X”存在的指示的任何事。应当认识到且理解，症状会随疾病或病况的不同而不同。与自身免疫病症有关的症状的非限制性实例包括疲劳、眩晕、不适、器官或组织的尺寸增大(例如在Grave′s病中的甲状腺肿大)，或者导致器官或组织的功能降低的器官或组织的破坏(例如在糖尿病中，胰腺的胰岛细胞被破坏)。
如本文所用，“炎症”或“炎性病况”是指对细胞损伤的局部反应，其以毛细管扩张、白细胞浸润、发红、发热、疼痛、肿胀以及常常功能丧失未标志，并且充当启动对有害试剂和损伤组织的消除的机制。如果限于关节，炎症或炎性病况的代表性症状包括发红、触碰发热的肿胀关节、关节疼痛和僵硬，以及关节功能丧失。全身性炎症应答可以产生“流感样”症状，例如发烧、发冷、疲劳/能量损失、头痛、食欲不振以及肌肉僵硬。
以下实施例意图进一步说明本发明的某些优选实施方案，且实际上是非限制性的。本领域技术人员利用不超出常规试验会认识到或者能够确定本文所述的具体物质和操作的许多等效物。
实施例
实施例1
本实施例的目的是测定取代1，3-环戊二酮化合物对蛋白激酶活性，特别是与所选择的与心血管危险因素相关的标记物的表达有关的那些蛋白激酶的活性的影响，以及另外对单核细胞-内皮细胞相互作用的影响。
META-060对体外激酶活性的抑制：在25μl的最终反应体积中，用特定的缓冲剂和肽底物、10mM乙酸镁(MgAcetate)和[γ-33P-ATP]培养所关注的激酶(5-10mU)。通过加入MgATP混合物启动反应。在室温下培养40分钟之后，通过加入5μl的3％磷酸溶液终止反应。然后将10μl反应液点到P30 filtermat上，并在50mM磷酸中洗涤三次，持续5分钟，并在甲醇中洗涤一次，然后进行干燥和闪烁计数。
META-060在HAEC细胞中对TNFa诱导的VCAM1、E-选择蛋白和MCP-1的抑制。将HAEC细胞用各种浓度的META-060(10mg/mL、5mg/mL和1mg/mL)预培养1小时，并用TNFa(10ng/ml)刺激8小时。通过基于细胞的ELISA法使用VCAM-1及E-选择蛋白的抗体测量VCAM-/E-选择蛋白水平，并相对于未刺激(对照)细胞计算诱导倍数。对于MCP-1，使用人MCP-1免疫试剂盒(R&D Systems)测量所述细胞培养基。数据表示8个单个样品的Mean±SD(平均值±标准偏差)。
META-060对TNFa诱导的单核细胞-内皮相互作用的抑制：通过利用基于微量培养板的测定来测量荧光标记的人类单核细胞(THP-1)与HAECs的融合单层细胞的粘合。将HAEC或THP-1细胞用META-060(10mg/mL)和小白菊内酯(10mM)预培养1小时，并用TNFa(10ng/ml)刺激8小时。在4℃下将THP-1细胞在HBSS培养基中用荧光染料BCECF-AM(1μmM最终浓度；Sigma)标记30分钟。然后将细胞用(37℃)HBSS培养基洗涤两次，并再度悬浮在EGM2培养基中。将100,000个THP-1细胞加到各个孔(96孔板)中并培养30分钟。通过将该板在密封条件下上下颠倒经离心将未结合的THP-1细胞用PBS洗涤两次。生成BCECF-AM标记的THP-1细胞的标准曲线。将200μl PBS加入到每个孔中，并利用Vector2(Perkin Elmer)荧光板读数器测量荧光(激发：485nm；发射：535nm)。THP-1刺激：(A)未刺激的THP-1细胞；(B)用TNFa刺激的THP-1细胞；(C)用小白菊内酯(10ug/ml)和TNFa刺激的THP-1细胞；(D)用META-060(10ug/ml)和TNFa刺激的THP-1细胞。数据表示6个单个样品的Mean±SD。
结果——在图1-3以及下表2中给出所述结果。
表2
40种抑制剂对85种激酶(参见Supporting Information)在10iM(G10)下的基尼系数和命中率(＞50％抑制)
 抑制剂   浓度(uM)   G10   命中率
 AG1024   10   0.568   11
 AG1296   10   0.498   4
 AG1478   10   0.500   25
 AG18   10   0.680   1
 AG183   10   0.460   14
 AG538   10   0.417   17
 Alsterpaullone   1   0.633   22
 Calphostin C   10   0.606   2
 Cdk2/5 inh.   10   0.555   7
 姜黄素   50   0.417   38
 EGCG   10   0.495   21
 染料木黄酮   10   0.582   0
 H89   10   0.442   34
 HA1077   10   0.650   19
 除草霉素A   10   0.534   0
 Hispidin   10   0.790   2
 靛玉红   10   0.291   52
 JNK inh II   10   0.445   35
 K252c   10   0.236   58
 KT5720   1   0.423   33
 薰草菌素A   1   0.726   0
 薰草菌素B   1   0.515   0
 LY294002   50   0.619   6
 奥罗莫星(olomoucin)   50   0.556   13
 PD153035   0.001   0.616   0
 PD184352   10   0.802   1
 PP1类似物   1   0.758   15
Figure BPA00001258735900211
所提供的数据表明Meta-060：a)在内皮细胞中抑制TNFa介导的MCP-1、VCAM-1和E-选择蛋白的表达；b)抑制TNFa介导的THP-1-HAEC细胞的相互作用；c)抑制炎症信号通路中所涉及的激酶，例如PKCbII、NF-kB、PI3K和GSK3；以及d)其在13uM浓度下的基尼系数值为0.81，表明META-060表现出对激酶抑制的高度特异性。
激酶抑制剂的开发因它们相对缺乏特异性[Bain，Biochem J 2003，Graczek 2007]导致脱靶副作用而复杂化。在一篇综述中，Graczek提议将基尼系数(0＝缺乏特异性，1＝最高特异性)作为预见激酶抑制剂对一组激酶的特异性的方法。测试四十种可商购抑制剂对85种激酶的抑制，基尼系数为0.1至0.8。我们在此加入以供比较。
实施例2
本项研究的目的是评价取代1，3-环戊二酮化合物对单核细胞-内皮相互作用、在单核细胞中MCP-1和MMP-9水平的表达、THP-1的影响。另外评价了各种炎症基因在TNFa激活的THP-1细胞中的表达以及在无细胞酶测定中对超过250种激酶的体外激酶筛选。
THP-1与HAEC细胞的相互作用(A)。将人单核细胞系、THP-1用低浓度(5mM)和高浓度(25mM)葡萄糖培养8天。将THP-1细胞用THIAA处理8小时。B.在存在测试化合物的情况下将THP-1细胞用TNFa激活8小时，在缺乏测试化合物的情况下激活1小时。将细胞用BCECF标记30分钟，并加入到人内皮细胞(HAEC)的单层细胞上，持续30分钟。利用BCECF标记的THP-1细胞的标准曲线测量结合到所述孔的THP-1细胞的数目，并从8个样品的平均值计算诱导倍数。
MCP-1表达：META-060在THP-1细胞中对TNFa(10ng/ml)、LPS(1ug/ml)和细胞因子(TNFa、II-1b和IFNg，各自10ng/ml)诱导的MCP-1产生的抑制。将细胞用各种浓度的META-060预培养1小时，并用TNFa(10ng/ml)刺激24小时。使用人MCP-1免疫试剂盒(R&D Systems)测量MCP-1水平。数据表示8个样品的Mean±SD。
MMP-9表达：META-060在THP-1细胞中对TNFa(10ng/ml)和LPS(1ug/ml)诱导的MMP-9产生的抑制。将细胞用各种浓度的META-060预培养1小时，并用A.TNFa(10ng/ml)或(B)LPS(1ug/ml)刺激24小时。使用人MMP-9免疫试剂盒(GE Healthcare)测量培养基中的MMP-9水平。数据表示代表性试验的Mean±SD。对于MMP-9活性，(C)将LPS条件培养基与Novex缓冲液(Invitrogen)以1∶1混合，并在含有0.1％明胶的10％SDS-PAGE中进行电泳。通过将SDS交换为Triton X-100(2.5％)，接着在37℃下在激活缓冲液(50mmol/L Tris，pH 7.6；5mmol/L CaCl2；0.2mol/L NaCl以及0.02％Brii)中培养24h来将凝胶复性。随后，将凝胶用Coomassie染色液(0.5％Coomassie R250；30％甲醇；10％乙酸)染色2h，接着脱色(50％甲醇和10％乙酸)。
电泳迁移率位移试验(EMSA)：将THP-1细胞用测试化合物预培养1小时，并用LPS(1μg/ml)刺激2小时。基本上如Dignam等[Nucl.Acids.Res 11：1475-1489)所述地制备核提取物，并利用标记的NF-kB共有DNA探针(5′AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC)经电泳迁移率位移试验来评价与DNA结合的NF-kB。
在THP-1细胞中蛋白质磷酸化的调节：将THP-1细胞接种到6孔板中，分别在存在以及缺少META-060(20ug/ml))的情况下预培养1小时，并用TNFa(10ng/ml)或LPS(10ug/ml)刺激1小时。按照MILLIPLEX MAP technology(Millipore，billerica，MA)的用户手册的指导制备细胞溶解液。使用Multi-Pathway Signaling Kit来利用Luminex系统检测细胞溶解液中的磷酸化Erk/MAP激酶1/2(Thr185/Tyr187)、STAT3(Ser727)、STAT5A/B(Tyr694/699)、JNK(Thr183/Tyr185)、p70 S6激酶(Thr412)和p38(Thr180/Tyr182)的变化。使用细胞溶解液(25ug/孔)，并按照所述指导测量所述溶解液中的磷蛋白，并使用未刺激的样品作为对照来计算诱导倍数(表3&4)。
表3：
Meta060在THP-1细胞中对TNFa介导的蛋白质磷酸化的影响
表4：
Meta060在THP-1细胞中对LPS介导的蛋白质磷酸化的影响
Figure BPA00001258735900233
转录因子在THP-1细胞中的调节：将THP-1细胞接种到100mm培养皿中，用META-060(10mg/ml))预培养1小时，并用TNFa(10ng/ml)或LPS(10ug/ml)刺激2小时。按照用户手册(Panomics，CA)的指导制备核提取物。根据使用Luminex 200的厂商说明书，利用Procarta
Figure BPA00001258735900241
 Transcription Factor Plex panel 1(Panomics，CA)测量转录因子。从3次测量计算诱导倍数。使用TFIID作为内部对照，并使用未激化的样品来计算诱导倍数。数据在表5&6中给出。
表5：
Meta060在THP-1细胞中对TNFa介导的转录因子的影响
表6：
Meta060在THP-1细胞中对LPS介导的转录因子的影响
Figure BPA00001258735900252
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人类基因阵列分析：将THP-1细胞用META-060(10mg/mL)或小白菊内酯(10mM)预培养1小时，并用TNFa(10ng/ml)刺激4小时。使用Affymetrix人类基因组阵列U133A 2.0分析基因并测量约22,000个转录物(由Expression Analysis Inc，North Carolina提供)。显示已知激活内皮与单核细胞相互作用的基因。各个值表示2个独立测量的平均值。
结果——在图4-8以及表7中给出本实施例的结果，并表明META-060抑制：a)高血糖症以及TNFa介导的THP-1-HAEC细胞的相互作用；b)细胞因子与LPS介导的MCP-1分泌；c)TNFa和LPS激活的MMP-9水平；d)LPS介导的NF-kB结合；以及e)TNFa在THP-1细胞中介导的炎症基因，包括MCP-1、VCAM、ICAM-1、MMP-9以及TNFa。
表7
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实施例3
四氢-异α酸对肱动脉血流介导的舒张的影响
本项研究的目的是评价口服给药四氢-异α酸(100mg)对肱动脉内皮反应性(responsiveness)(心血管危险的量度)的影响。
根据Corretti，MC等在Guidelines for the Ultrasound Assessment of Endothelial-Dependent Flow-Mediated Vasodilation of the Brachial Artery-A Report of the International Brachial Artery Reactive Task Force.J.Am.Coll.Cadiol.2002；39(2)：257-65中所概述的操作，通过使用Sonosite MicroMaxx超声机测量血流介导的血管舒张来评价三个健康个体中的肱动脉内皮反应性。简言之，使用膨胀到高于基线收缩压50mmHg的测血压布袖袋诱导所述肱动脉中的缺血，并通过超声测量充血后流速。在口服1056mg剂量的四氢-异α酸之后的1至2小时内重复该测试。
结果：注意到在给药四氢-异α酸之前，观察到个体的流速相对于基线具有40.2％的提高(计算为100×(充血的流速-基线低速率/基线流速的比值))。在给药四氢-异α酸之后1至2小时，观察到流速相对于基线具有63.3％的提高(计算为100×(充血的流速-基线低速率/基线流速的比值))。这是相对于基线的57％的流速提高。进一步注意到，给药四氢-异α酸导致充血后流速峰值比未经治疗的个体的充血后流速峰值提高28.2％。流速的提高可以归因于血管直径在治疗期间保持血压及心率相对恒定的范围内的增加。

Claims (12)

1.在有需要的个体中改善心血管危险因素的方法，所述方法包括用治疗有效量的取代1，3-环戊二酮化合物治疗所述个体，其中所述量调节与心血管危险因素相关的标记基因表达的表达。
2.权利要求1的方法，其中所述取代1，3-环戊二酮化合物选自(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮以及(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-戊酰基环戊-2-烯-1-酮。
3.权利要求1的方法，其中所述与心血管危险相关的标记基因选自TNFα、MCP-1、VCAM-1、MMP-3、ICAM1以及SDF1。
4.权利要求1的方法，其进一步包括生活方式改变或药物治疗。
5.权利要求1的方法，其中所述生活方式改变或药物治疗选自降低血压，调节胆固醇水平，治疗糖尿病，增加锻炼，减少炎症、肥胖和体重，治疗促血栓形成因子，减少血清同型半胱氨酸和脂蛋白(a)，减少血清甘油三酯，戒烟以及降低压力。
6.在有需要的个体中改善血管弹性的方法，所述方法包括用治疗有效量的取代1，3-环戊二酮化合物治疗所述个体，其中所述量增加血管弹性或血管舒张。
7.权利要求6的方法，其中所述取代1，3-环戊二酮化合物选自(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮以及(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-戊酰基环戊-2-烯-1-酮。
8.在有需要的个体中改善心血管健康的组合物，所述组合物包含治疗有效量的取代1，3-环戊二酮化合物，其中所述量(a)调节与心血管危险相关的标记基因表达的表达；或者(b)增加血管弹性或血管舒张。
9.权利要求8的组合物，其中所述取代1，3-环戊二酮化合物选自(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-2-(3-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮、(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(-)-(4S，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-(3-甲基丙酰基)环戊-2-烯-1-酮、(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-2-(2-甲基丁酰基)-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)环戊-2-烯-1-酮以及(+)-(4R，5S)-3，4-二羟基-5-(3-甲基丁基)-4-(4-甲基戊酰基)-2-戊酰基环戊-2-烯-1-酮。
10.权利要求8的组合物，其中所述组合物还包含药学上可接受的赋形剂。
11.权利要求10的组合物，其中所述药学上可接受的赋形剂选自包衣剂、等渗及吸收延迟剂、粘合剂、胶粘剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、矫味剂、甜味剂、吸收剂、洗涤剂及乳化剂。
12.权利要求8的组合物，其中所述组合物还包含选自抗氧化剂、维生素、矿物质、蛋白质、脂肪及碳水化合物中的一种或多种成分。
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